1，血清中可能出現(xiàn)的沉淀物是什么？
基于HyClone公司的經(jīng)驗以及多年的試驗研究，用于細胞培養(yǎng)的胎牛血清以及其它血清中可能會存在以下種類的沉淀物：:( 1）纖維蛋白，它是經(jīng)常出現(xiàn)的較大的沉淀物，可以達到1-2mm的，可以用肉眼觀察到。因為血清都是在低溫下進行收集和快速處理的，一些纖維蛋白原（可溶性的形成絮狀纖維蛋白的前體）在處理過程中仍然處于溶解狀態(tài)，當經(jīng)過最后的過濾分裝后，就會在瓶中凝結(jié)出現(xiàn)纖維蛋白沉淀。（2）磷酸鈣，它也是常見的一種沉淀物，通常會使血清出現(xiàn)渾濁，并且在37℃培養(yǎng)的時候會增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點，這些小黑點由于布朗運動看上去可以活動，因此經(jīng)常被誤認為是微生物污染;（3）膽固醇，脂肪酸酯以及一些蛋白質(zhì)。他們也是血清中出現(xiàn)沉淀物的常見原因。
2，血清中的沉淀物對細胞培養(yǎng)有什么影響？
（1）細胞生長，我們的試驗以及經(jīng)驗表明沉淀物不會影響細胞培養(yǎng)，我們的客戶以及其它血清生產(chǎn)商也證明了這一點。（2）過濾，如果血清中出現(xiàn)大量的沉淀物，血清將很難過濾。一般說來，因為在血清生產(chǎn)時最后已經(jīng)經(jīng)過100納米或者40納米的過濾處理，并且經(jīng)過了嚴格的無菌檢測，因此海克隆不推薦再過濾用于細胞培養(yǎng)的血清。在實驗室中沒有必要再過濾處理血清，在大規(guī)模的細胞培養(yǎng)中往往將血清直接加到培養(yǎng)基中一起過濾。（3）污染，磷酸鈣往往被誤認為微生物污染而引起爭端。研究者可能會在血清中觀察到一些絮狀的沉淀，因此就會比較警覺的去做無菌試驗，將血清放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)幾天，結(jié)果可能會觀察到更多的絮狀沉淀，因此就斷定血清被污染了。并且當研究者將血清樣品放在倒置顯微鏡下觀察時往往可以看到一些可以運動的小黑點，因此 就更加確認是血清被污染了。于是，研究者就會花費更多的時間和精力來和生產(chǎn)商確認，但最終確定血清沒有被污染而只是沉淀。為了避免這些問題的發(fā)生，我們建議不要直接將血清放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)觀察是否有菌，而是將血清加到瓊脂板上進行培養(yǎng)以觀察是否有細菌生長。另外，也可以進行革蘭氏染色，在油鏡下觀察，以確認是否有污染。
3、如何避免血清中沉淀物的出現(xiàn)？
首先要注意正確的血清解凍步驟，而且溶解過程中一定要每隔一段時間均勻而緩慢的搖動血清。我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在下列情況下沉淀物可能增加，使用中應(yīng)該盡量避免：（1）熱滅活血清；（2）在37℃下培養(yǎng)血清；（3）反復(fù)凍融；（4）γ射線照射；（5）長期儲存在2-8℃；（6）在室溫下放置時間過長
4、如何去除血清中的沉淀？
如想去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝到無菌離心管中，以400g離心，上清液即可直接加入到培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。注意：不要以過濾的方式去除這些絮狀沉淀物，因為這可能阻塞濾膜。
5、 冷凍管應(yīng)如何解凍？
取出冷凍管后，須立即放入37°C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預(yù)防冷凍管之爆裂。
6、細胞冷凍管解凍培養(yǎng)時，是否應(yīng)馬上去除DMSO？
除少數(shù)特別注明對DMSO敏感之細胞外，絕大部分細胞株（包括懸浮性細胞），在解凍之后，應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中，待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之問題。
7、客戶拿到細胞后，應(yīng)該注意什么？
客戶收到細胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各一張），排除細胞本身污染的情況；收到細胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。
我們寄的細胞一般是T25的，客戶收到細胞可以觀察細胞密度，如果長到70-90%就可以傳代養(yǎng)了，沒有的話可以繼續(xù)將T25放到孵化箱中培養(yǎng)
8、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基？
不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細胞培養(yǎng)基，若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基，細胞大都無法立即適應(yīng)，造成細胞無法存活。
9.L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)中重要嗎？它在溶液中不穩(wěn)定嗎？
L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)時是重要的。脫掉氨基后，L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細胞的能量來源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時間后會降解，但是確切的降解率一直沒有最終定論。L-谷氨酰胺的降解導(dǎo)致氨的形成，而氨對于一些細胞具有毒性
10.培養(yǎng)細胞時應(yīng)使用5%或10%CO2？或根本沒有影響？
一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng)，而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細胞培養(yǎng)時應(yīng)使用的CO2濃度。當培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7g時，細胞培養(yǎng)時應(yīng)使用10%CO2；當培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5g時，則應(yīng)使用5CO2培養(yǎng)細胞。
11.培養(yǎng)基中是否須添加抗生素
除于特殊篩選系統(tǒng)中外，一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下，培養(yǎng)基中不應(yīng)添加任何抗生素
12.DMSO之等級和無菌過濾之方式為何
冷凍保存使用之DMSO等級，必須為Tissueculturegrade之DMSO(如SigmaD2650)，其本身即為無菌狀況，第一次開瓶后應(yīng)立即少量分裝于無菌試管中，保存于4°C，避免反復(fù)冷凍解凍造成DMSO之裂解而釋出有害物質(zhì)，并可減少污染之機會。若要過濾DMSO，則須使用耐DMSO之Nylon材質(zhì)濾膜
13.冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一:冷凍管置于4°C30-0分鐘→(-20°C30分鐘*)→-80°C16~18小時(或隔夜)→液氮槽vaporphase長期儲存。冷凍保存方法二:冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3°C至–80°C以下，再放入液氮槽vaporphase長期儲存。*-20°C不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80°C冰箱中，惟存活率稍微降低一些
14.細胞欲冷凍保存時，細胞冷凍管內(nèi)應(yīng)有多少細胞濃度
冷凍管內(nèi)細胞數(shù)目一般為1x106cells/mlvial，融合瘤細胞則以5x106cells/mlvial為宜
15.應(yīng)如何避免細胞污染
細胞污染的種類可分成細菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉?jié){菌。主要的污染原因為無菌操作技術(shù)不當、操作室環(huán)境不佳、污染之血清和污染之細胞等。嚴格之無菌操作技術(shù)、清潔的環(huán)境、與品質(zhì)良好之細胞來源和培養(yǎng)基配制是減低污染之最好方法
16.購買之細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因
實驗人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳，常見原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后，加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細胞置于–80°C太久
